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Une nouvelle RT-PCR en temps réel triplex en une étape pour la détection des virus de la fièvre aphteuse
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Edité par CCSD -
International audience. La fièvre aphteuse (FA) est une maladie animale hautement contagieuse et dévastatrice, affectant les artiodactyles. La FA est causée par un picornavirus, le virus de la fièvre aphteuse (FMDV pour Foot and Mouth Disease Virus). Le laboratoire national et européen de référence pour la fièvre aphteuse, à l’ANSES, à Maisons-Alfort, a développé et validé une nouvelle méthode RT-PCR en temps réel triplex en une étape, pour la détection des sept sérotypes de FMDV. Cette méthode permet la détection simultanée de deux régions les plus conservées du génome viral : les régions codantes de l'ARN polymérase ARN-dépendante (3D) et de la protéine non structurale 2B, ainsi que celle du gène cellulaire GAPDH comme contrôle endogène. La méthode a été entièrement validée conformément aux normes françaises et selon les critères de l'OIE à partir d'échantillons d'épithélium et d'écouvillons nasaux. La sensibilité analytique a été estimée à 10 copies/µL d'ARN viral. Les spécificités diagnostiques sont de 100% avec des intervalles de confiance de 96-100% pour l'épithélium (n=96) et de 86-99% pour les écouvillons nasaux (n=37). Les sensibilités diagnostiques sont de 100% avec des intervalles de confiance de 96-100% pour l'épithélium (n=102) et de 84-100% pour les écouvillons nasaux (n=21). La robustesse de cette méthode a été évaluée en intra-laboratoire et inter-laboratoire grâce à la participation de dix laboratoires européens, avec un écart-type relatif de 5,30% et 8,37%, présentant une incertitude de 1,88% et 3,20%, pour la cible 2B et la cible 3D respectivement.Cette nouvelle méthode s’avère être un outil de diagnostic rapide, efficace, fiable et robuste pour la détection des FMDV, et améliore ainsi le diagnostic de routine et d’urgence pour la FA.
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