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The centromeric nucleosome and the fiber of nucleosomes. Le nucléosome centromérique et la fibre de chromatine
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Edité par CCSD -
In this report, I presented the results I obtained during the time I spent in the laboratory of Biochimie de la chromatine, often in collaboration with others laboratories in France, in Ukraine and the United States.Two questions interested me most:Structure and function of the centromeric nucleosome. The centromere, which allowschromatids segregation during mitosis, is one of the biggest nuclear complexes. Many of thecentromere component proteins have been identified but little is known about the structureand dynamics of the centromeric nucleosome. The original “minicercle approach”, developedin this lab in the last 20 years, was invaluable in this study. The results were unexpected andgave an answer to the question of the exclusive localization of CENP-A in the centromere(article I).Torsional manipulation of chromatin fibers. The response of chromatin fibers undertraction has been investigated for some time. But we are the first to have studied theirresponse under torsion in a magnetic tweezers set-up. The notions of nucleosome access todifferent conformational states (article II) and of tetrasome chiral transition, initially describedusing the “minicercle approach”, could be extended to the chromatin fiber. Moreover, weshowed that the chiral transition concerned the whole nucleosome, and not only the tetrasome(article III). . Ce mémoire présente les résultats que j’ai obtenus pendant ces années passées au laboratoire de Biochimie de la Chromatine, le plus souvent en collaboration avec d’autres laboratoires en France, en Ukraine et aux Etats-Unis. Deux questions m’ont particulièrement intéressée : Structure et dynamique du nucléosome centromérique. Le centromère, qui permet la ségrégation des chromatides sœurs pendant la mitose, est un des plus gros complexes nucléaires. Alors qu’on connaît maintenant beaucoup des protéines qui le constituent, on ne savait pratiquement rien sur la structure et la dynamique du nucléosome centromérique, qui a la particularité de contenir un variant de H3 : CENP-A. La technique originale des minicercles, développée au laboratoire depuis de nombreuses années, a été ici irremplaçable. Les résultats, inattendus, nous ont permis de donner un élément de réponse à la question centrale du mécanisme de l’adressage de ce variant d’histone au centromère (article I). Réponse en rotation d’une fibre de chromatine. La réponse en traction d’une fibre de chromatine est relativement bien connue. Mais nous sommes les premiers à avoir étudié sa réponse en rotation, grâce à un système de pinces magnétiques. Les résultats ont permis de généraliser à la fibre de chromatine les notions d’états conformationnels du nucléosome (article II) et de transition chirale du tétrasome (un constituant du nucléosome), initialement mises au jour grâce au système des minicercles. On a ainsi montré que la transition chirale pouvait concerner le nucléosome entier, et pas seulement le tétrasome (article III).
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