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Mise en évidence dans un modèle murin d’un risque prothrombotique associé à une mutation de la tubuline β1
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Edité par CCSD -
International audience. Introduction : Les microtubules MTs, constitués de tubuline α et β, jouent un rôle crucial dans la biogenèse des plaquettes et leur morphologie. Alors que des mutations de la tubuline β1 (TUBB1) étaient jusqu’à présent associées à une macrothrombopénie et sans rôle très clair dans la fonction plaquettaire, nos travaux1 ont mis en évidence une nouvelle mutation (homozygote) de TUBB1 (p.P160L) associée à des macroplaquettes sans thrombopénie, une hyperactivation plaquettaire et une dysgénésie thyroïdienne. Notre objectif est de caractériser le phénotype hémostatique d’un modèle murin porteur de la mutation TUBB1 p.P160L et de déterminer le(s) mécanisme(s) moléculaire(s) mis en jeu pouvant expliquer le phénotype des patients.Matériels et Méthodes : Un modèle murin « knock-in » hétérozygote (HET) et homozygote (KI) pour la mutation p.P160L a été généré par CRISPR-Cas9. Les fonctions plaquettaires et l’organisation des MTs ont été étudiées in vitro et in vivo et comparées aux souris contrôles (WT).Résultats :Défaut morphologique : le compte plaquettaire des souris HET et KI est normal, mais une augmentation du volume plaquettaire moyen est observée (WT: 5,05 ; HET: 5,22 ; KI: 5,37 μm3; p<0,001). L’analyse par microscopie électronique confirme la présence de macroplaquettes associée à une désorganisation des MTs dans la bande marginale. L’expression de TUBB1 est significativement (p<0,01) diminuée, respectivement, dans les plaquettes HET et KI de 22,6 ± 4.5% et 42,6 ± 5,4%, par rapport aux WT. Ces résultats suggèrent un impact de la mutation sur l’organisation des MTs et la morphologie plaquettaire.Activation augmentée de l’intégrine αIIbβ3 : une augmentation significative (p<0,001) de l’activation de l’intégrine αIIbβ3 est observée par cytométrie de flux pour HET (41 ± 12%) et KI (126 ± 22%) par rapport aux plaquettes WT après activation par la convulxine, alors que les réponses sont normales à l’ADP et à la thrombine. Par ailleurs, l’inhibition des voies d’amplification (ADP et thromboxane A2) restaure une activation normale de l’intégrine. Ces résultats suggèrent que l’hyperactivation de αIIbβ3 est spécifique de la voie glycoprotéine (GP) VI et est dépendante de l’amplification.Profil prothrombotique: lorsque le sang est perfusé sur matrice de collagène à des taux de cisaillement artériolaire, les thrombi formés ont une taille significativement augmentée de 108 ± 45% pour HET et 104 ± 39% pour KI par rapport à WT (p<0,05). Par ailleurs, dans un modèle de thrombose in vivo (lésion au FeCl3), le temps d’occlusion est réduit dans les artérioles des souris HET et KI (WT: 33 ± 4 min ; HET: 25 ± 2 min ; KI: 22 ± 2 min ; p<0,05). Ces résultats suggèrent que la mutation est associée à un profil prothrombotique.Conclusion : Le modèle murin reproduit le phénotype observé chez les patients. Pour la première fois nous mettons en évidence qu’une mutation de TUBB1 peut être associée à un risque prothrombotique dépendant de la voie GPVI et des voies d’amplification par l’ADP/ thromboxane A2.1 Stoupa A et al. TUBB1 mutations cause thyroid dysgenesis associated with abnormal platelet physiology. EMBO Mol Med. 2018;10:e9569.
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