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Immunodétection des adduits aldéhydiques de type hydroxyalkénal dans le protéome et le tissu aortique de souris athérosclérotiques – mise au point méthodologique
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Edité par CCSD -
La peroxydation lipidique des acides gras polyinsaturés (AGPI) induit notamment la formation d’aldéhydes réactifs capables de former des adduits avec différentes molécules dont les protéines, en se liant sur leurs résidus aminoacyls. Il a été montré que le 4-hydroxy-trans-2-nonenal (4-HNE), issu de l’oxydation des AGPI oméga-6, joue un rôle dans l‘athérogenèse. Les AGPI oméga-3 à longue chaîne (EPA : acide eicosapentaénoïque et DHA : acide docosahexaénoïque) sont également susceptibles d’être peroxydés entraînant la formation du 4-hydroxyhexenal (4-HHE). Cependant, plusieurs études expérimentales ont montré des effets anti-athérogènes des AGPI oméga-3 à longue chaîne. Il reste à déterminer si cet effet passe par une modulation (quantitative ou qualitative) de la production de métabolites peroxydés. Ceux-ci pourraient être dire ctement impliqués dans la modulation de l’activité de protéines. Ainsi, nous avons étudié l’abondance des modifications post-traductionnelles oxydatives (MPTO) affectant le protéome d’aorte de souris LDLR-/-, un modèle d’athérosclérose, recevant per os différentes doses de DHA. L’analyse protéomique est réalisée d’une part par électrophorèse bidimensionnelle couplée à une immuno-détection des adduits 4-HNE et 4-HHE et d’autre part par la quantification de protéines carbonylées. Huit protéines présentant des adduits 4-HNE ont été identifiées, par spectrométrie de masse MALDI-ToF, aussi bien dans le groupe témoin que celui recevant le DHA. Ces protéines sont essentiellement mitochondriales et interviennent dans le métabolisme des lipides. Par ailleurs, nous avons localisé des adduits 4-HNE-protéines dans les lésions athéromateuses des aortes de souris par immunohistochimie (IHC). Cependant nous n’avons pas détecté d’adduits 4-HHE ni au niveau du protéome ni sur des coupes d’aorte. Ce résultat pourrait être dû à la faible abondance du 4-HHE ou à la non-spécificité de l’anticorps utilisé. Toutefois, nous avons pu démontrer la présence de 4-HHE, par IHC, dans des cellules endothéliales humaines en culture, en particulier après leur exposition au DHA. Ces mises au point nous permettent l’étude de différentes MPTO et leurs conséquences dans différentes conditions physiopathologiques et nutritionnelles.
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